Шановні колеги ! 18-го лютого (вівторок) 2025 р. о 10-30 в Актовій залі на науковому семінарі «Актуальні проблеми сучасної біохімії» Інституту біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України буде заслухано доповідь кандидата біологічних наук наукової співробітниці відділу сигнальних механізмів клітин С К АТ Е Р Н О Ї Тетяни Дмитрівни «Дослідження ролі адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у динамічному контролі редокс-гомеостазу і редокс-залежного сигналювання в пухлинних клітинах різного тканинного походження».
Традиційно до цього інформаційного листа додаю авторські тези доповіді.
При цьому повідомляю, що прийняти участь у роботі семінару можна буде й у дистанційному форматі відповідно до наступної адреси:
https://meet.google.com/jwc-rtnd-rbt
Запрошую Вас та Ваших колег до участі у роботі нашого семінару.
З повагою - С.О.Костерін
10 лютого 2025 р.
к.б.н., н.с. Скатерна Тетяна Дмитрівна
відділ сигнальних механізмів клітини
Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України
"Дослідження ролі адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у динамічному контролі редокс-гомеостазу і редокс-залежного сигналювання в пухлинних клітинах різного тканинного походження"
Адаптерний протеїн Ruk/CIN85 належить до родини адаптерних/риштувальних протеїнів, які функціонують як критичні компоненти внутрішньоклітинних сигнальних мереж. Було показано, що Ruk/CIN85 бере участь у контролі злоякісної трансформації та метастазування пухлинних клітин шляхом модулювання активності сигнальних шляхів, залучених до контролю клітинної проліферації, міграції та інвазії на системному рівні. Опубліковані дані свідчать про те, що Ruk/CIN85 необхідний для регулювання везикулярного транспорту, ремоделювання цитоскелету, запрограмованої клітинної загибелі (Havrylov et al., 2010). Результати попередніх досліджень, отриманих у відділі, продемонстрували, що продукування H2O2 клітинами аденокарциноми молочної залози лінії MCF-7, залежне від функціонування мембранних NADPH-оксидазних комплексів, позитивно корелює з рівнями експресії Ruk/CIN85. За допомогою флуоресцентної мікроскопії in cellulo з використанням плазмідного вектора, що кодує внутрішньоклітинний біосенсор пероксиду водню HyPer, злитий з Ruk/CIN85, Ruk/CIN85-HyPer-N1 (Bazalii та ін., 2015), продемонстровано співлокалізацію Ruk/CIN85 і продукування H2O2 у внутрішньоклітинних везикулярних структурах в тимчасово трансфікованих клітинах MCF-7. Були також встановлені особливості диференційних змін в експресії генів NOX (Bazalii et al., 2016), зумовлені up-регулюванням Ruk/CIN85 у клітинах MCF-7.
Метою даного дослідження на базі Університету Масарика (м. Брно, Чеська Республіка) в рамках “FEBS Short Term Fellowship” було проаналізувати молекулярні механізми залучення адаптерного протеїну Ruk/CIN85 до контролю окисно-відновного потенціалу та автофагії, які є критичними для виживання пухлинних клітин з високим метастатичним потенціалом, на рівні сигнальних мереж пухлинних клітин. Для досягнення поставленої мети були використані такі клітинні моделі: сублінії клітин дрібноклітинної карциноми легені людини A549, остеосаркома людини HOS-2 і SAOS-2, меланоми миші B16/F10 з надекспресією Ruk/CIN85 (Ruk/CIN85 Up) і відповідні контрольні клітини Mock. За допомогою флуоресцентного барвника 2',7'-дихлордигідрофлуоресцеїну діацетату (CM-H2DCFDA, Life Technologies, США) протоковою цитофлуорориметрією та хемілюмінесцентним аналізом з люмінолом та пероксидазою хрону було встановлено Ruk/CIN85-залежне підвищення рівнів активних форм кисню (АФК) і їх ефективне зниження за умов впливу апоциніну, інгібітора збирання NADPH-оксидазних комплексів. Міграційна активність клітин субліній, яку оцінювали за ефективністю заростання подряпини у клітинному моношарі та методології xCELLigence in vitro, суттєво залежала від вмісту Ruk/CIN85 та знижувалась при дії апоциніну. Методом qRT-PCR отримано інформацію про здатність Ruk/CIN85 модулювати рівень експресії ізоформ NOX у досліджуваних клітинах. Методом Вестерн-блот аналізу досліджено залежність вмісту/активності основних редокс-залежних сигнальних компонентів, маркерів аутофагії та апоптозу від рівнів експресії Ruk/CIN85 у пухлинних клітинах B16-F10 та A549, а також вплив апоциніну на ці показники. Вміст і субклітинну локалізацію Beclin1, маркера автофагії, було проаналізовано конфокальною мікроскопією в клітинах HOS-2, SAOS-2 і A549 з різними рівнями експресії Ruk/CIN85.
Міжмолекулярні взаємодії відіграють ключову роль у компартменталізації компонентів сигнальних мереж, залежно від рівня АФК, а також можуть впливати на специфічність, ефективність та динаміку сигналювання (Rczek et al., 2015). Попередні дані щодо прямої фізичної взаємодії Ruk/CIN85 з субодиницею організатором Tks4 NOX1-вмісного NADPH-оксидазного комплексу (Gianni et al., 2009, 2011; Havrylov et al., 2009), а також позитивний кореляційний зв’язок між рівнем експресії Ruk/CIN85 та продукуванням АФК у пухлинних клітинах, дозволяють зробити висновок про можливість функціонування Ruk/CIN85 у складі NADPH-оксидазного комплексу, впливаючи таким чином на інтенсивність редокс-залежного сигналювання і, як наслідок, на контроль біологічних відповідей пухлинних клітин.