Спосіб визначення токсичної дії на організм наночастинок фулеренів С60
за експресією гена HLA-DRA
(Захищено патентом на корисну модель № 124940)
Проблема.: Проблема забруднення об'єктів довкілля наночастинками, в тому числі і фулеренами С60, гостро стоїть останнім часом у багатьох країнах світу, а також і в Україні, оскільки при попаданні в живі організми вони можуть проявляти токсичну дію. Швидкий розвиток нанотехнологій дав початок широкому діапазону застосування техногенних наноматеріалів в конкретних областях біомедицини для лікування, діагностики, моніторингу, контролю та відновлення біологічних систем на молекулярному рівні.
Фулерени є класом карбонових наночастинок, які мають унікальні властивості і є перспективними для застосування в різних технологіях, у тому числі в біології та медицині, але їх токсичність вивчена ще недостатньо. Наночастинки фулеренів С60 у дуже низьких концентраціях порушують експресію гена, що відіграє центральну роль у роботі імунної системи, оскільки зв'язує пептиди позаклітинних антигенів, що асоціюється із послабленням протидії інфекціям, розвитком діабету 2 типу та астми, а також із ростом злоякісних пухлин.
Визначення токсичної дії фулеренів С60 ускладняється тим, що ще не виявлені високочутливі молекулярно-генетичні маркери, які б давали можливість виявити їх негативний вплив за низьких концентрацій.
Створено: спосіб визначення токсичної дії фулеренів С60 на організм за рівнем експресії гена HLA-DRA в культурі нормальних астроцитів людини.
Визначення: токсичної дії на організм наночастинок фулеренів С60 включає додавання наночастинок фулеренів С60 до культури нормальних астроцитів людини лінії NHA/TS, виділення їх із клітин РНК, вимірювання рівня експресії генів методом кількісної полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) та визначення токсичної дії за змінами в експресії генів. При цьому вимірюють ступінь експресії гена HLA-DRA.
Перевагами цього способу є:
- використання експресії гена HLA-DRA як параметра для визначення токсичної дії наночастинок фулеренів С60 на організм;
- використання культури астроцитів людини для визначення токсичної дії наночастинок фулеренів С60 на організм;
- високі чутливість і точність визначення токсичної дії на організм дуже низьких концентрацій наночастинок фулеренів С60: 0,1 мкг/мл;
- можливість прогнозування ймовірності патологічних станів під дією дуже низьких концентрацій наночастинок фулеренів С60;
- інформативність і зручність у виконанні.
Рекомендовано: для широкого впровадження.
Розроблено та апробовано: у відділі молекулярної біології Інституту біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України.
Контакти:
Teл.: +380 (44) 235-7157. Факс: +380 (44) 234-1296.
E-mail: tto@biochem.kiev.ua. http://biochemistry.org.ua
Адреса: Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України,
вул. Леонтовича, 9, м. Kиїв, 01054, Україна.