Спосіб визначення активності гепаринів для субстанцій
і готових лікарських форм гепаринів
(Захищено патентом України на винахід № 97067)
Проблема. Сьогодні в медичній практиці для дослідження системи гемостазу та при використанні гепаринотерапії застосовують методи і тест-системи на їх основі, чутливі до гепарину. Методи базуються на використанні хромогенних субстратів, факторів згортання крові, спеціальних речовин та методологічних підходів. Усі ці методи мають ряд недоліків:
так, працемісткість, використання крові тварин, тривалий час виконання аналізу (4 год.) та візуальна фіксація результатів досліджень у способі визначення антикоагулянтної активності гепарину за умов зсідання плазми крові в присутності іонів кальцію; використання багатокомпонентних систем та спеціального обладнання при визначенні анти-Ха-факторної активності низькомолекулярних гепаринів (НМГ) в медичній практиці оптичними, електрохімічними та коагулогічними методами; потреба в спеціальному обладнанні, дорогих реактивах та витратних матеріалах при визначенні анти-Ха-факторної активності низькомолекулярних гепаринів (НМГ) з використанням хромогенних субстратів.
Створено. Новий ефективний спосіб визначення активності гепаринів для субстанцій і готових лікарських форм гепаринів. Спосіб базується на принципі калібрування протаміну сульфату стандартними зразками гепаринів. За допомогою фототроду при довжині хвилі 555 нм розчином каліброваного протаміну сульфату титрують розчини гепаринів з невідомою активністю до точки еквівалентності з подальшим розрахунком активності гепаринів за формулою.
Переваги Способу:
- дозволяє автоматично з високою точністю визначати об'єм розчину каліброваного протаміну сульфату (до 1х10-3 мл), витраченого на титрування розчинів не фракціонованих гепаринів (НГ) та НМГ з невідомою активністю;
- дозволяє швидко (протягом 10 хв) визначати антикоагулянтну активність НГ та анти-Ха-факторну активність НМГ, використовуючи лише один реагент (протаміну сульфат) порівняно з найближчим аналогами, де для визначення антикоагулянтної активності НГ використовують кров тварин та декілька реагентів, а для визначення анти-Ха-факторної активності НМГ використовують реагенти високої вартості: антитромбмін III, фактор Ха та спеціальне устаткування;
- дає можливість визначати антикоагулянтну активність НГ та анти-Ха-факторну активність НМГ для широкого діапазону значень вихідної концентрації НГ та/або НМГ.
- є простим і зручним у виконанні та не праце містким.
Застосування: у фармацевтичній промисловості для контролю якості субстанцій та готових лікарських форм як нефракціонованих, так і низькомолекулярних гепаринів, і для контролю очистки устаткування при їх виробництві.
Розроблено та апробовано: у відділі хімії та біохімії ферментів Інституту біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України.
Контакти:
Teл.: +380 (44) 235-7157. Факс: +380 (44) 234-1296.
E-mail: tto@biochem.kiev.ua. http://biochemistry.org.ua
Адреса: Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАН України,
вул. Леонтовича, 9, м. Kиїв, 01054, Україна.