Оберіть свою мову

Телефонний довідник

 
 

GoogleTranslate

Ukrainian Bulgarian Czech Danish English Estonian Finnish French German Greek Hungarian Italian Japanese Latvian Lithuanian Norwegian Polish Portuguese Romanian Slovak Slovenian Spanish Turkish
 

УДК 616-006.04:577.122:612.014

O. Єфанова , О. Журавель, Ю. Юзефович, М. Солдаткіна, П. Погрібний

 

Дослідження ролі Бета-дефенсину-2 людини як регулятора клітинного циклу в моделі in vitro

 

Інститут експериментальної патології, онкології та радіобіології ім.Р.Є.Кавецького НАНУ, Київ

Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. Вам необхідно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

Дефенсини, мультифункціональні пептидні антибіотики, що віднесено до групи алармінів – білків-компонентів системи неспецифічного імунітету - є сигналами небезпеки для організму при інфекції, запаленні та злоякісній трансформації. В залежності від локальної концентрації дефенсини можуть мати про- чи анти-проліферативні ефекти на пухлинні клітини, викликати апоптоз та інгібувати деякі клітинні ферменти. В той же час механізм дії цих біомолекул на клітинному рівні залишається невстановленим. Метою нашого дослідження було встановити механізм впливу бета-дефенсину-2 людини (human beta-defensin-2 (hBD-2) на проліферативні властивості злоякісно трансформованих епітеліальних клітин людини. Матеріали та методи: Дослідження було проведено в моделі in vitro на 2-х клітинних лініях – аденокарциноми легені людини лінії А549 та епідермоїдної карциноми людини лінії А431 з використанням рекомбінантного hBD-2, експресованого в бактеріях у вигляді злитого білка hBD-2-GST. Вплив hBD-2 на швидкість клітинного поділу та на розподіл клітин по фазах клітинного циклу досліджували методами прямого підрахунку клітин та проточної цитометрії. Для аналізу внутришньоклітинної локалізації дефенсину застосовували конфокальну мікроскопію та імуноцитохімічний аналіз, а вплив hBD-2 на сигнальні каскади, залучені до регуляції клітинного циклу, досліджували методом Вестерн-блот-аналізу. Результати: Згідно отриманих даних, рекомбінантний hBD-2 має концентраційно залежний вплив на параметри росту культивованих клітин ліній A549 та A431 і викликає значне пригнічення проліферації клітин в діапазоні концентрацій від 100 нг/мл  до 500 нг/мл (p<0.05). Із застосуванням проточної цитометрії нами було встановлено, що таке пригнічення росту пов’язане з арештом клітинного циклу у фазі G1/S. Методом Вестерн-блот аналізу було задетектована відсутність фосфорильованої форми pRB в клітинах, що інкубували з дефенсином, у порівнянні з контрольними клітинами. Дослідження внутришньоклітинної локалізації hBD-2 в клітинах лінії А549, інкубованих з hBD-2 протягом 48 годин, продемонструвало, що екзогенний дефенсин виявляється у цитоплазмі та значною мірою  акумулюється в ядрі. Висновки: Результати нашого дослідження свідчать про те, що можливим механізмом дії бета-дефенсину-2 людини на культивовані епітеліальні клітини може бути hBD-2-залежний арешт клітин у фазі G1/S клітинного циклу.