Оберіть свою мову

Телефонний довідник

 
 

GoogleTranslate

Ukrainian Bulgarian Czech Danish English Estonian Finnish French German Greek Hungarian Italian Japanese Latvian Lithuanian Norwegian Polish Portuguese Romanian Slovak Slovenian Spanish Turkish
 

УДК 576.344

Р.Г. ВАСИЛЬЄВ

КУЛЬТИВУВАННЯ МУЛЬТПОТЕНТНИХ СТОВБУРОВИХ КЛІТИН – ПОХІДНИХ НЕРВОВОГО ГРЕБЕНЯ У КОЛАГЕНОВОМУ ТА ФІБРИНОВОМУ ГЕЛЯХ

Інститут генетичної та регенеративної НАМН України, Київ

rvasiliev@ukr.net

В останнє десятиріччя з ряду тканин дорослих хребетних виділені мультипотентні стовбурові клітини – похідні нервового гребеня (МСК-ПНГ). Вони мають здатність до самовідновлення та диференціювання у нейральні, мезенхімальні та інші типи клітин. МСК-ПНГ викликають значний інтерес щодо використання у регенеративній медицині.

Мета: оцінити можливість культивування МСК-ПНГ у колагеновому та фібриновому гелях.

Методи. Культуру МСК-ПНГ отримували з бульбарного регіону волосяного фолікула вібрис мишей лінії FVB. Культивували у середовищі DMEM:F12 з 10 % ембріональної телячої сироватки (ЕТС). Здатність до росту за умов клональної щільності досліджували у тесті на колоніє-утворюючі одиниці (100 клітин на чашку Петрі 100 мм). Здатність до самовідновлення визначали пересівом клональної колонії у чашку Петрі 100 мм за допомогою клонуючих циліндрів. Остеогенне диференціювання проводили у DMEM з 10 % ЕТС, 100 нМ дексаметазону, 10 мМ ?-глицерофосфату та 50 мкг/мл аскорбат-2-фосфату. Адипогенне диференціювання проводили у DMEM з 10 % ЕТС, 1 мкМ дексаметазону, 200 мкМ індометацину, 500 мкМ ізобутілметілксантину та 5 мкг/мл інсуліну. Колагеновий гель (КГ) виготовляли з оцотово-кислого розчину колагену (10 мг/мл) за методом E.Bell (1981). Фібриновий гель (ФГ) виготовляли шляхом обєднання 0,5 мл розчину фібриногену (4 мг/мл) з 0,5 мл розчину тромбіну (2 од/мл). Клітини засівалися у концетрації 5х105/мл гелю та культивувалися протягом 7 діб.

Результати. МСК-ПНГ характеризувались значним проліферативним потенціалом, здатністю до росту за умов клональної щільності, та самовідновленням при їх субклонуванні. Мультипотентність МСК-ПНГ підтверджена диференціацією в остеобласти та адипоцити. У КГ та ФГ клітини виживали та ремоделювали гелі. Після створення гелю клітини мали округлу форму, яка через 24 г змінювалась на фібробластоподібну. При подальшому культивуванні відбувалось утворення міжклітинних контактів. Культивування МСК-ПНГ у колагеновому гелі призводило до його контракції (зменшення діаметру гелю на 30 %). При культивуванні у фібриновому гелі відбувалась його деградація з повною резорбцією після 7 діб. При цьому кількість клітин становила більше 800 000, що свідчить про проліферацію клітин у ФГ.

Висновки. При культивуванні МСК-ПНГ у колагеновому та фібриновому гелях клітини виживали, формували міжклітинні контакти та ремоделювали гелі. Культивування клітин в тривимірних гелях дозволяє створювати трансплантати заданої форми для заповнення дефектів тканин.